微生物呼吸道样本涂片革兰染色镜检时，常遇到 “似青蛙卵样”的细菌（见图1），为粘液型铜绿假单胞菌的镜下形态，该菌与原菌有何不同呢？铜绿假单胞菌为革兰氏阴性杆菌，菌体细长，一端有单鞭毛；菌落呈蓝绿色或荧光色、生姜味、氧化酶和动力试验阳性，42°C可生长；可产生多种水溶性色素如绿脓素、红脓素和黑脓素。

  粘液型铜绿假单胞菌是铜绿假单胞菌的一种生物变异形态，表现为菌体粗大微弯曲，菌体周围粘液层形成，菌落由原来的粗糙型转变为粘液型，与原菌相比，具有生长缓慢、耐药性高，易形成生物膜，为囊性纤维化患者最主要的呼吸道病原菌[1]。

  患者、女、40岁，因“反复咳嗽、咳痰20余年，加重伴心累、气紧20余天”入院。行胸部增强CT示：双肺部分支气管柱状及囊状扩张，考虑支气管扩张伴感染；双肺轻度慢支炎、肺气肿样改变，双肺部分小叶间隔稍增厚。

  实验室检查：血常规 白细胞计数18.77×109/L↑，中性粒细胞计数14.04×109/L↑，C反应蛋白9.38mg/L↑，血沉43mm/H↑。

  微生物痰细菌培养，颜色外观：黄色、脓性，将样本接种于血琼脂平板、巧克力平板及麦康凯平板，同时进行涂片，涂片革兰染色可见：合格痰，革兰氏阴性杆菌（4+），菌体呈蛙卵状，菌体周围有红色膜性物质包裹，见图2。

  经过CO2 35°C 24小时培养平板原始区可见少量水滴状粘液状透明菌落，培养48小时平板第三区可见大量无色、透明、湿润、粘液型菌落，菌落间相互融合，见图3-4。

  入院后根据患者院外治疗情况、痰培养及胸部CT结果，考虑肺部严重感染，予以哌拉西林/他唑巴坦钠4.5g静滴1/8小时抗感染，期间辅以祛痰、解痉、平喘、舒张支气管、改善肺功能等对症治疗。

  微生物涂片及培养鉴别判定的结果为粘液型铜绿假单胞菌，药敏试验方法：①KB法做药敏试验时，采用MH平板，需将其孵育时间延长至48h。②将粘液型菌落多次传代恢复粗造型菌落后，KB法，采用MH平板，培养16-18小时。③将菌落接种至肉汤增菌后，调0.5号麦氏点，仪器上机测定。

  根据微生物鉴定及药敏试验结果，调整抗生素为哌拉西林/他唑巴坦钠联用大环内酯类药物协同治疗。ABX指南感染性疾病的诊断与治疗推荐在慢性肺部疾病（如囊性纤维化）患者中，好的肺部清洁措施（如粘液溶解剂、胸部物理治疗CPT、体味引流）是重要的辅助治疗方法[2]。患者经上述治疗后，病情较前明显好转，复查血常规结果正常及CT双肺吸收好转出院。

  粘液性铜绿假单胞菌易形成生物膜，生物膜是具有一定功能的立体结构，由胞外多糖基质、嵌在基质中的多个菌落及水通道组成，在不利于细菌生长的环境下，细菌通过分泌藻酸盐胞外多糖使自身相互连结成膜状，黏附于物体表面。

  由于粘液型铜绿假单胞菌的胞外多糖具有干扰正常宿主吞噬防御和促进生物膜形成，在囊性纤维化患者肺中，铜绿假单胞菌从粗糙型到粘液型的转变通常与肺功能的迅速下降和预后不良有关。

  该菌生物学特征为：菌体被大量的粘液层包裹，对所有物质的渗透性均降低；对营养的东西摄取能力不够，细菌生长缓慢；对抗生素渗透能力变弱[3]。由于生物膜的低渗透性，导致被膜中的细菌可躲避抗菌药物的攻击，造成其长期定值，造成慢性、反复感染。同时也会造成药敏试验结果与临床治疗结果不相符合，在临床用药带来困难。

  粘液型铜绿假单胞菌的检出能够最终靠直接涂片革兰氏染色镜检发现革兰氏粗大阴性杆菌“呈青蛙卵样”，周围出现浅粉色的染色物质包裹着，但需通过细菌培养方法观察到粘液型的菌落并鉴定结果。

  需要注意的是该细菌生长较缓慢，初次培养的时候，菌落在麦康凯平板上比血平板及巧克力平板生长好，平板培养48小时菌落更典型。这些粘液型的铜绿假单胞菌的出现代表了肺中生物膜的存在，应提示及报告该菌为粘液型铜绿假单胞菌，同时及时与临床沟通，提示临床使用敏感抗菌药物联合14圆环或15圆环大环内酯类抗生素进行及时有效的治疗[3]。

  一个简短的小案例带给了我们很多的思考。微生物检验的角度，我们思考黏液性铜绿假单胞菌的特征是什么？痰涂片镜下所见的“蛙卵样”结构和黏液型的菌落给咱们提供了独特的形态学特征。黏液型铜绿假单胞菌药敏试验是微生物检验工作必须直面的难题，文中提到的小技巧你get到了吗？菌落充分生长，延长MH孵育时间至48小时；反复传代菌落形态变至粗糙型，时间不可控，临床工作不推荐；肉汤增菌，建议我们大家尝试后对效果进行评估。

  临床治疗的角度，好的肺部清洁推荐措施如粘液溶解剂、胸部物理治疗CPT、引流，这些都是重要的辅助治疗方法，同时建议应用敏感的抗生素治疗.

  [1]王辉,马筱玲,钱渊,等.临床微生物学手册[M].北京，中华医学电子音像出版社,2017:982-984.

  [2]马小军,徐英春,刘正印,等.ABX指南感染性疾病的诊断与治疗[M].北京，科学技术文献出版社,2016:377-379.

  [3]卢先雷.黏液型铜绿假单胞菌下呼吸道感染诊断治疗新进展.CHINET.2015.05.04.

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